芬乐酸?及两种竞品抑菌和杀菌作用的体外实验

PlusVet
Thu, 21 May 2020 07:09:00 +0000
反刍动物, 猪, 肉鸡, 蛋鸡和种鸡, 鸭和鹅, 动物保健, 大肠杆菌, 植物提取物, 沙门氏菌, 芬乐酸?

实验基础设计

本实验使用稀释中和方法，该方法基于欧洲官方的EN 1040：2005“化学消毒剂和防腐剂-定量悬浮试验，用于评估化学消毒剂和防腐剂的基本杀菌活性”。

该方法的基本原理如下：

为了估计消毒剂或抗菌剂的抗菌活性，将所测试化合物的稀释液与细菌悬液混合，并在培养一段时间后，检测剩余细菌的生长能力。

对于弱酸，实验证实若不使用中和剂，其体外抗菌活性可能会被高估。原因是弱酸通过两种机制作用于细菌：

1. 通过降低环境pH值产生酸性应激。

2. 未解离的弱酸通过细菌细胞膜扩散，然后在细胞内解离，这会使细胞环境酸化并破坏细菌细胞代谢。

当使用弱酸作为抗菌剂或消毒剂时，通过降低环境pH值而产生抗菌作用（作用机理1），作用效果会根据酸的使用环境的不同而变化。 例如，当将一样多的弱酸添加于家禽场的饮用水中时，饮用水的最终pH值将取决于水的初始pH值和硬度。 由于动物每个消化器官中的pH值都不同，当弱酸经过动物消化系统时，也会发生同样的情况。

出于此原因，体外实验中应更关注于作用机理2产生的效果，即弱酸穿透细菌细胞壁并破坏其代谢的能力。

通过添加中和剂，使体系中同时存在缓冲蛋白胨水和磷酸氢二钠，使得通过机理1产生作用的抗菌活性被停止或大大减弱，体外试验检测抗菌活性时主要检测的是通过作用机理2产生的效果。

实验材料

缓冲蛋白胨水 (BPW)

MH琼脂

ATCC 14028沙门氏菌菌株

ATCC 25923大肠杆菌菌株

磷酸氢二钠

测试产品：芬乐酸?，竞品A，竞品B

试管、培养皿

实验步骤

将测试产品芬乐酸，竞品A，竞品B用水稀释至5%。

配制缓冲蛋白胨水并灭菌，分装至 3*8*2 支试管中，每管8ml。

加入8ml稀释后的产品溶液至每组试管的第一支试管中，并进行梯度稀释。最终每支试管中产品浓度如下：

每支试管中加入1ml 0.015 mol / L磷酸氢二钠溶液，混合均匀后静置5分钟。

每支试管中加入1ml 10³ CFU/ml沙门氏菌液或10³ CFU/ml大肠杆菌液。

37℃下培养24小时。

最低抑菌浓度（MIC）：培养完成后，观察试管混浊情况，未变混浊的试管中的最低产品浓度即为该产品的最低抑菌浓度。最低抑菌浓度（MIC）定义为具有抑菌作用（防止细菌可见生长）的抗菌成分或试剂能够抑制细菌生长的最低浓度。

最低杀菌浓度（MBC）：取1ml培养液于培养皿中，加入15mlMH琼脂，37℃培养48小时，观察菌落生长情况，无菌落生长的平板中的最低产品浓度即为该产品的最低杀菌浓度。

最低杀菌浓度（MBC）是杀菌剂在特定条件下，在一段固定的，可适当延长的时间内杀死细菌所需的最低浓度。可以通过将MIC测试的肉汤稀释液培养至不含测试试剂的琼脂平板中来确定。通过确定可降低初始细菌接种物活力达预定降低率（例如≥99.9％）的最低杀菌剂浓度来确定最低杀菌浓度（MBC）。MBC是MIC的补充；MIC测试显示的抗菌剂能极大抑制生长的最低水平，而MBC显示的是抗菌剂会导致微生物死亡的最低水平。 换句话说，如果MIC表现出抑制作用，但其不会引起微生物死亡，因此将培养液接种到琼脂上可能仍会导致微生物增殖。若MBC不超过MIC的四倍，则通常认为该抗菌剂具有杀菌作用。

结果

产品推荐剂量

芬乐酸?：每升水中添加0.5-1 ml

竞品A:每升水中添加1.5-2ml

竞品B:每升水中添加1-2ml

结论

在确定这三种产品的抑菌效果（最低抑菌浓度，MIC）时，k8凯发发现所有产品对沙门氏菌的MIC相同，而芬乐酸?对大肠杆菌的MIC最低，其次是竞品A和竞品 B．

在确定三种产品的抗菌效果（最低杀菌浓度，MBC）时，k8凯发发现所有产品对沙门氏菌的MBC相同，而芬乐酸?和竞争产品A对大肠杆菌的MBC最低。

可以得出结论，“体外”实验芬乐酸?对沙门氏菌和大肠杆菌最有效。

该试验证明芬乐酸?针对沙门氏菌和大肠杆菌的MIC和MBC在0.39 ml / L至0.78 ml / L之间，其在推荐的商业剂量（每升饮用水中添加0.5-1 ml）下可作为有效的水消毒剂。

与竞品A和B相比，其较低的推荐剂量是芬乐酸?的另一个竞争优势。